Дзякуй за наведванне Nature.com. Версія браўзэра, які вы выкарыстоўваеце, мае абмежаваную падтрымку CSS. Для дасягнення найлепшых вынікаў мы рэкамендуем выкарыстоўваць больш новую версію вашага браўзэра (альбо адключыць рэжым сумяшчальнасці ў Internet Explorer). У той жа час, каб забяспечыць пастаянную падтрымку, мы адлюстроўваем сайт без кладкі і JavaScript.
Рост мікробных ран часта выяўляецца як біяфільмы, якія перашкаджаюць вылячэнню і цяжка выкараніць. Новыя срэбныя павязкі заяўляюць пра барацьбу з раневымі інфекцыямі, але іх антыбіёфільмавая эфектыўнасць і незалежныя ад інфекцыі лячэбныя эфекты звычайна невядомыя. Выкарыстоўваючы мадэлі біяфільмы ў прабірцы і ў натуральных умовах стафілакока і Pseudomonas aeruginosa, мы паведамляем пра эфектыўнасць павязкаў AG1+ іёнаў; АГ1+ павязкі, якія змяшчаюць этилендиаминететрааксусную кіслату і хларыд бензэтонія (AG1+/EDTA/BC), і павязкі, якія змяшчаюць нітрат срэбра (Ag oxysalts). , якія вырабляюць іёны Ag1+, Ag2+ і Ag3+ для барацьбы з біяпленкай раны і яе ўплыў на вылячэнне. Павязкі AG1+ аказалі мінімальнае ўздзеянне на біяплёнкі раны ў прабірцы і ў мышэй (C57BL/6J). У адрозненне ад іх, кіслароднымі солямі AG і AG1+/EDTA/BC павязкі значна знізілі колькасць жыццяздольных бактэрый у біяфільмах у прабірцы і прадэманстравалі значнае зніжэнне бактэрыяльных і кампанентаў EPS у біяфільмах раны мышы. Гэтыя папраўкі аказалі розны ўплыў на гаенне біяфільма, інфіцыраваных і не біяфільмавых ран, а салёныя павязкі з кіслародам аказваюць больш карыснае ўздзеянне на пераасэнсаванне, памер раны і запаленне ў параўнанні з кантрольнымі метадамі лячэння і іншых срэбных павязкаў. Розныя фізіка-хімічныя ўласцівасці срэбных павязкаў могуць мець розны ўплыў на біяпленкі раны і вылячэнне, і гэта варта ўлічваць пры выбары запраўкі для лячэння ран, заражаных біяпленкамі.
Хранічныя раны вызначаюцца як "раны, якія не праходзяць праз звычайныя стадыі вылячэння ў парадку і своечасова" 1. Хранічныя раны ствараюць псіхалагічную, сацыяльную і эканамічную нагрузку для пацыентаў і сістэму аховы здароўя. Штогадовыя выдаткі на NHS на лячэнне ран і звязаных з імі спадарожных захворванняў ацэньваюцца ў 8,3 млрд фунтаў у 2017–182 гадах. У цяперашні час хранічныя раны таксама з'яўляюцца надзённай праблемай у ЗША, і Medicare ацэньвае гадавы кошт лячэння пацыентаў з ранамі на ўзроўні $ 28,1– 96,8 млрд.
Інфекцыя з'яўляецца асноўным фактарам, які прадухіляе гаенне ран. Інфекцыі часта выяўляюцца як біяфільмы, якія прысутнічаюць у 78% нелегаючых хранічных ран. Біяфільмы ўтвараюцца, калі мікраарганізмы становяцца незваротна прымацаванымі да паверхняў, такіх як раневыя паверхні, і могуць аб'яднацца, утвараючы супольнасці, якія вырабляюць пазаклеткавы палімер (EPS). Біяпленка раны звязаны з падвышанай запаленчай рэакцыяй, што прыводзіць да пашкоджання тканін, што можа затрымаць або прадухіліць гаенне4. Павелічэнне пашкоджання тканін можа часткова звязана з павелічэннем актыўнасці матрычных металапратэіназ, калагеназы, эластазы і рэактыўных відаў кіслароду5. Больш за тое, запаленчыя клеткі і біяфільмы самі па сабе з'яўляюцца высокімі спажыўцамі кіслароду і таму могуць выклікаць мясцовую гіпаксею тканін, высільваючы клеткі жыццёва важнага кіслароду, неабходных для эфектыўнага аднаўлення тканін6.
Спелыя біяфільмы вельмі ўстойлівыя да антымікробных сродкаў, патрабуючы агрэсіўных стратэгій для кантролю біяпленкі, напрыклад, механічнага лячэння з наступным эфектыўным антымікробным лячэннем. Паколькі біяфільмы могуць хутка рэгенеравацца, эфектыўныя антымікробныя прэпараты могуць знізіць рызыку паўторнага ўтварэння пасля хірургічнага смецця7.
Срэбра ўсё часцей выкарыстоўваецца ў антымікробных павязках і часта выкарыстоўваецца як лячэнне першай лініі пры хранічных заражаных ранах. Існуе мноства камерцыйна даступных срэбных павязкаў, кожная з якіх змяшчае іншы срэбны склад, канцэнтрацыя і базавая матрыца. Поспехі ў срэбных павязках прывялі да распрацоўкі новых срэбных павязкаў. Металічная форма срэбра (AG0) інертная; Для дасягнення антымікробнай эфектыўнасці ён павінен страціць электронны ўтварэнне іённага срэбра (AG1+). Традыцыйныя срэбныя павязкі ўтрымліваюць срэбныя злучэнні або металічнае срэбра, якія пры ўздзеянні вадкасці раскладаюцца, утвараючы іёны Ag1+. Гэтыя іёны AG1+ рэагуюць з бактэрыяльнай клеткай, выдаляючы электроны з структурных кампанентаў або крытычных працэсаў, неабходных для выжывання. Запатэнтаваная тэхналогія прывяла да распрацоўкі новага срэбнага злучэння, Ag Oxysalts (срэбны нітрат, AG7NO11), якое ўваходзіць у павязкі раны. У адрозненне ад традыцыйнага срэбра, раскладанне соляў, якія змяшчаюць кісларод, ствараюць срэбра з больш высокай валентнасцю (Ag1+, Ag2+і Ag3+). Даследаванні in vitro паказалі, што нізкая канцэнтрацыя соляў з кіслародам больш эфектыўныя, чым аднаразовы іённы срэбра (AG1+) ад патагенных бактэрый, такіх як Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus і Escherichia coli8,9. Яшчэ адзін новы тып срэбнай запраўкі ўключае ў сябе дадатковыя інгрэдыенты, а менавіта этилендиаминтетрааксусную кіслату (EDTA) і хларыд бензатонія (да н.э.), якія, як паведамляецца, арыентуюцца на EPS Biofilm і тым самым павялічваюць пранікненне срэбра ў біяфільм. Гэтыя новыя срэбныя тэхналогіі прапануюць новыя спосабы нацэльвання на біяфільмы раны. Аднак важна ўздзеянне гэтых антымікробных прэпаратаў на рану і незалежнае ад інфекцыі, каб пераканацца, што яны не ствараюць неспрыяльнага асяроддзя раны і затрымкі гаення. Паведамляецца, што з некалькімі срэбнымі павязкамі 1011 былі заклапочаныя заклапочанасцю на цытастатычнасць срэбра ў прабірцы. Аднак цытастатычнасць in vitro яшчэ не пераведзена ў таксічнасць у натуральных умовах, і некалькі павязкаў AG1+ прадэманстравалі добры профіль бяспекі12.
Тут мы даследавалі эфектыўнасць павязкаў карбоксиметилцеллюлозы, якія змяшчаюць новыя срэбныя прэпараты супраць біяфільма раны in vitro і in vivo. Акрамя таго, былі ацэнены ўплыў гэтых павязкаў на імунную рэакцыю і вылячэнне незалежна ад заражэння.
Усе выкарыстаныя павязкі былі даступныя ў продажы. Запраўка валакна з гель-валакна 3M (3M, Knutsford, Вялікабрытанія)-гэта не-антымікробная 100% -ная завязка з гель-валакна Carboxymethylcellulose (CMC), якая выкарыстоўвалася ў якасці кантрольнай запраўкі ў гэтым даследаванні. Былі ацэненыя тры антымікробныя срэбныя павязкі CMC, а менавіта 3M Kerracel AG (3M, Knutsford, Вялікабрытанія), якая змяшчае 1,7 мас.%. Сярэбраная соль з кіслародам (AG7NO11) у больш высокіх валентных іёнах срэбра (Ag1+, Ag2+і Ag3+). Падчас раскладання іёнаў Ag7NO11, Ag1+, Ag2+ і Ag3+ утвараюцца ў суадносінах 1: 2: 4. AquaCel AG Extra Owding, якая змяшчае 1,2% срэбранага хларыду (AG1+) (Convatec, Deeside, UK) 13 і AquaCel AG+дадатковая запраўка, якая змяшчае 1,2% срэбра хларыд (AG1+), EDTA і бензолид хлорыд (Convatec, Deeside, Вялікабрытанія) 14.
Штам, які выкарыстоўваецца ў гэтым даследаванні, былі Pseudomonas aeruginosa NCTC 10781 (грамадскае здароўе Англія, Солсберы) і Staphylococcus aureus NCTC 6571 (грамадскае здароўе Англія, Солсберы).
Бактэрыі вырошчвалі на працягу ночы ў булёне Muller-Hinton (Oxoid, Altrincham, Вялікабрытанія). Затым культуру начлегу была разведзена 1: 100 у булёне Мюлера-Хінтана і 200 мкл выстаўлены на стэрыльныя мембраны Cyclopore Whatman Whatman (Whatman Plc, Maidstone, Вялікабрытанія) на пласцінах агара Мюлера-Хінтана (Sigma-Aldrich Company Ltd, Kent, Great Britain ). ) Каланіяльная адукацыя біяпленкі пры 37 ° С на працягу 24 гадзін. Гэтыя каланіяльныя біяфільмы былі правераны на лагарыфмічную ўсаджванне.
Разрэжце запраўку на 3 квадратныя кавалачкі і папярэдне маістын стэрыльнай деионизированной вадой. Пакладзеце павязку над біяплёнкай калоніі на агарнай талерцы. Кожныя 24 га біяфільма выдаляліся, а жыццяздольныя бактэрыі ў біяплёнцы (CFU/ML) былі колькасна ацэнены паслядоўным развядзеннем (10-1 да 10-7) у адвары нейтралізацыі дзён (Merck-Millipore). Пасля 24 гадзін інкубацыі пры 37 ° С, на пласцінах агара Мюлера-Хінтана праводзілася стандартная колькасць пласцінак. Кожнае лячэнне і момант часу праводзілася ў трох экземплярах, а для кожнага развядзення паўтаралася колькасць пласцінак.
Скура з свінога жывата атрымліваецца ад жаночых белых свіней на працягу 15 хвілін забою ў адпаведнасці са стандартамі экспарту Еўрапейскага Саюза. Скуру была паголена і чысцілі алкагольнымі сурвэткамі, затым замарожана пры -80 ° С на працягу 24 гадзін, каб дэвіталізаваць скуру. Пасля адтавання 1 см2 кавалачкі скуры тры разы прамывалі PBS, 0,6% гіпахларыту натрыю і 70% этанолу на працягу 20 хвілін кожны раз. Перш чым выдаліць эпідэрміс, выдаліце любы пакінуты этанол, прамыўшы 3 разы ў стэрыльным PBS. Скура культывуецца ў 6-лункавай талерцы з капронавай мембранай таўловай 0,45 мкм (Merck-Millipore) зверху і 3 паглынаючымі калодкамі (Merck-Millipore), якая змяшчае 3 мл сыроваткі буйной рагатай жывёлы (Sigma), дапоўненая 10% мадыфікаванай Дульбека, змененай з 10%, змененай Дульбека Арол. Сярэдні (мадыфікаваны арол Dulbecco - Aldrich Ltd.).
Каланіяльныя біяфільмы вырошчвалі, як апісана для даследаванняў уздзеяння біяпленкі. Пасля культывавання біяпленкі на мембране на працягу 72 гадзін біяплёнкі наносілі на паверхню скуры пры дапамозе стэрыльнай цыкла прышчэпкі і мембраны выдалялі. Затым біяплёнку інкубавалі на дерме свіней яшчэ 24 гадзіны пры 37 ° С, каб біяпленка пасталела і прытрымлівалася скуры свінні. Пасля таго, як біяплёнкі саспелі і прымацавалі, запраўку 1,5 см2, папярэдне падманутая стэрыльнай дыстыляванай вадой, наносілі непасрэдна на паверхню скуры і вытрымліваюць пры 37 ° С на працягу 24 гадзін. Жыццёвыя бактэрыі былі візуалізаваны шляхам афарбоўвання, раўнамерна ўжываючы рэагент жыццяздольнасці клетак прэсталю (Invitrogen, Life Technologies, Paisley, UK) на верхавінную паверхню кожнага эксплантата і інкубаваўшы яго на працягу 5 хвілін. Выкарыстоўвайце лічбавую камеру Leica DFC425, каб імгненна здымаць выявы на мікраскопе Leica MZ8. Вобласці ружовага колеру былі колькасна ацэнены пры дапамозе праграмнага забеспячэння Image Pro версіі 10 (Media Cybernetics Inc, Rockville, MD Image-Pro (Mediacy.com)). Сканаванне электроннай мікраскапіі праводзілася, як апісана ніжэй.
Бактэрыі, выгадаваныя на працягу ночы, разводзілі 1: 100 у булёне Мюлера-Хінтана. 200 мкл культуры было дададзена ў стэрыльную мембрану Cyclopore Whatman Whatman (Whatman, Maidstone, Вялікабрытанія) і высаджваюць на Мюлер-Хінтан Агар. Пласціны для біяпленкі інкубавалі пры 37 ° С на працягу 72 гадзін, каб забяспечыць спела біяплёнкі.
Пасля 3 -х дзён паспявання біяплёнкі квадратны павязку 3 см2 размяшчалася непасрэдна на біяплёнцы і вытрымліваюць пры 37 ° С на працягу 24 гадзін. Пасля выдалення павязкі з паверхні біяплёнкі, на паверхню кожнай біяплёнкі дадаюць 1 мл рэагента жыццяздольнасці клетак прэсталю (Invitrogen, Waltham, MA) на працягу 20 секунд. Паверхні былі высушаны да таго, як былі запісаны змены колеру з выкарыстаннем лічбавай камеры Nikon D2300 (Nikon UK Ltd., Kingston, UK).
Падрыхтуйце начныя культуры на агары Mueller-Hinton, перадайце асобныя калоніі на 10 мл булёна Мюлера-Хінтана і вытрымлівайце на шейкеры пры 37 ° С (100 абаротаў у хвіліну). Пасля інкубацыі на працягу ночы культура была разведзена 1: 100 у булёне Мюлера-Хінтана, а 300 мкл была заўважана на круглай мембране Whatman Cyclopore 0,2 мкМ (Whatman International, Maidstone, Вялікабрытанія) на агары Мюлера-Хінтана і вытрымлівалі пры 37 ° С на працягу 72 гадзін на працягу 72 гадзін на працягу 72 гадзін, на працягу 72 гадзін. . . Спелая біяпленка наносілі на рану, як апісана ніжэй.
Уся праца з жывёламі праводзілася ў Манчэстэрскім універсітэце ў рамках ліцэнзіі на праект, зацверджанай Упраўленнем па дабрабыце жывёл і этычным аглядам (P8721BD27) і ў адпаведнасці з рэкамендацыямі, апублікаванымі ў Міністэрстве Міністэрства ўнутраных спраў у рамках перагледжанага ASPA 2012 года. Усе аўтары прытрымліваліся рэкамендацый па прыбыцці. Для ўсіх даследаванняў у натуральных умовах былі выкарыстаны васьмітыднёвыя мышы C57BL/6J (Envigo, Oxon, UK). Мышэй анестэзіравалі изофлураном (Piramal Cretcy Care Ltd, West Drayton, UK), а іх спінныя паверхні былі паголены і ачышчаны. Затым кожнай мышы было дало экскусальную рану 2 × 6 мм пры дапамозе біяпсійнага ўдару Stiefel (Schuco International, Hertfordshire, Вялікабрытанія). Для ран, інфіцыраваных біяпленкамі, наносіце 72-гадзінны каланіяльны біяплёнкі, вырашчаны на мембране, як апісана вышэй, да скурнага пласта раны пры дапамозе стэрыльнай цыкла прышчэпкі адразу пасля траўмы і адкіньце мембрану. Адзін квадратны сантыметр запраўкі папярэдне пакладзена стэрыльнай вадой для падтрымання вільготнай раневай асяроддзя. Павязкі былі нанесены непасрэдна да кожнай раны і пакрыта 3M Tegaderm Film (3M, Bracknell, Вялікабрытанія) і вадкім клейкам мастызола (красамоўная ахова здароўя, Фернддейл, штат Мічыган), якія наносяць па краях, каб забяспечыць дадатковую адгезію. Бупренорфин (AnimalCare, York, UK) уводзіўся ў канцэнтрацыі 0,1 мг/кг у якасці абязбольвання. Зніміце мышэй праз тры дні пасля траўмы, выкарыстоўваючы метад Графіку 1 і выдаліце, удвая, удвая і захоўвайце вобласць раны па меры неабходнасці.
Гематоксилин (Thermofisher Scientific) і эозін (Thermofisher Scientific) праводзілі ў адпаведнасці з пратаколам вытворцы. Плошча раны і паўторна -рээпітэлізацыю былі колькасна ацэнены пры дапамозе праграмнага забеспячэння Image Pro версіі 10 (Media Cybernetics Inc, Rockville, MD).
Тканкавыя зрэзы былі дэвайкваны ў ксілоне (Thermofisher Scientific, Loughborough, Вялікабрытанія), рэгізлі 100–50% этанолу і ненадоўга апускаюць у деионизированную ваду (Thermofisher Scientific). Імунагістахімія была праведзена з выкарыстаннем камплекта Vectastain Elite ABC PK-6104 (Vector Laboratories, Burlingame, CA) у адпаведнасці з пратаколам вытворцы. Першасныя антыцелы да нейтрофілаў NIMP-R14 (Thermofisher Scientific) і макрофагов MS CD107b Pure M3/84 (BD Biosciences, Wokingham, Вялікабрытанія) былі разведзены 1: 100 у блакаванні раствора і дадаюць да паверхні разрэзу, пасля чаго 2 антыцелы анты-антыцелы, віктарын, правешчаны вектаст ABC і Vector Nova Red Peroxidase (HRP) набор субстрата (Vector Laboratories, Burlingame, CA) і проціпаказаны гематаксілінам. Выявы былі набыты з дапамогай мікраскопа Olympus BX43 і лічбавай камеры Olympus DP73 (Olympus, Southend-on-Sea, Вялікабрытанія).
Узоры скуры фіксавалі ў 2,5% глутаральдэгід і 4% фармальдэгід у 0,1 М HEPES (pH 7,4) на працягу 24 гадзін пры 4 ° С. Узоры абязводжваюць пры дапамозе градуіраванага этанолу і высушаны ў CO2 пры дапамозе сушылкі крытычнай кропкі кворума K850 (Quorum Technologies Ltd, Loughton, UK) і распылення, пакрытым сплавам Gold-Palladium з выкарыстаннем Quorum SC7620 Mini Sputerer/Sputerer/Glow Signal System. Узоры выяўляліся з дапамогай сканавання электроннага мікраскопа FEI Quanta 250 (Thermofisher Scientific) для візуалізацыі цэнтральнай кропкі раны.
Іёдыд TOTO-1 (2 мкМ) наносілі на высечаную паверхню раны мышы і вытрымліваюць на працягу 5 мін пры 37 ° С (Thermofisher Scientific) і апрацавалі Syto-60 (10 мкМ) пры 37 ° С (Thermofisher Scientific). 15-хвілінныя Z-Stack выявы былі створаны пры дапамозе Leica TCS SP8.
Дадзеныя аб біялагічнай і тэхнічнай рэплікацыі былі ўкладзены ў табліцы і прааналізаваны з дапамогай праграмнага забеспячэння GraphPad Prism V9 (GraphPad Software, La Jolla, CA). Аднабаковы аналіз дысперсіі з некалькімі параўнаннямі з выкарыстаннем пост-тэсту Даннета быў выкарыстаны для праверкі адрозненняў паміж кожнай апрацоўкай і неімікробным кіраваннем. Значэнне P <0,05 лічылася значным.
Эфектыўнасць кудзелістых павязкаў срэбнага геля была ўпершыню ацэненая супраць біяпленкі калоній стафілакока Аўрэса і Pseudomonas aeruginosa in vitro. Срэбныя павязкі ўтрымліваюць розныя формулы срэбра: традыцыйныя срэбныя павязкі вырабляюць іёны Ag1+; Срэбныя павязкі, якія могуць вырабляць іёны Ag1+ пасля дадання EDTA/BC, могуць знішчыць матрыцу біяпленкі і падвяргаць бактэрыі срэбрам пад антыбактэрыйным эфектам срэбра. іёны15 і павязкі, якія змяшчаюць кіслародныя солі, якія вырабляюць іёны Ag1+, Ag2+ і Ag3+. Яго эфектыўнасць параўноўвалася з неімікробным кіраваннем, вырабленай з жэлевых валокнаў. Астатнія жыццяздольныя бактэрыі ў біяплёнцы ацэньваліся кожныя 24 гадзіны на працягу 8 дзён (малюнак 1). У 5 -ы дзень біяфільм быў адноўлены 3,85 × 105. Staphylococcus aureus або 1,22 × 105p. Aeruginosa для ацэнкі аднаўлення біяпленкі. У параўнанні з неімікробнымі павязкамі AG1+ павязкі аказалі мінімальны ўплыў на жыццяздольнасць бактэрый у стафілакоку і біяфільмах Pseudomonas Aeruginosa на працягу 5 дзён. У адрозненне ад гэтага, павязкі, якія змяшчаюць кісларод AG і AG1 + + EDTA/BC, былі эфектыўнымі для знішчэння бактэрый у біяплёнцы на працягу 5 дзён. Пасля неаднаразовага прышчэпкі планктонных бактэрый у 5 -ы дзень аднаўлення біяпленкі не назіралася (мал. 1).
Колькаснае вызначэнне жыццяздольных бактэрый у стафілакоку і біяфільмах Pseudomonas aeruginosa пасля лячэння срэбнымі павязкамі. Калоніі біяпленкі стафілакока і псеўдамонас-аэругінозы былі апрацаваны срэбнымі павязкамі або неімікробным кіраваннем, а колькасць жыццяздольных бактэрый, якія засталіся, вызначалася кожныя 24 гадзіны. Праз 5 дзён біяфільм быў адноўлены 3,85 × 105. Staphylococcus aureus або 1,22 × 105p. Калоніі Bacterioplankton Pseudomonas aeruginosa ўтварыліся індывідуальна для ацэнкі аднаўлення біяпленкі. Графікі паказваюць сярэднюю +/- Стандартная памылка.
Для візуалізацыі ўплыву срэбных павязкаў на жыццяздольнасць біяпленкі прымяняліся для спелых біяпленкі, выгадаваныя на свіней скуры ex vivo. Праз 24 гадзіны запраўка выдаляецца, а біяпленка афарбоўваюць сінім рэактыўным фарбавальнікам, які метаболізуецца жывымі бактэрыямі да ружовага колеру. Біяфільмы, апрацаваныя кантрольнымі павязкамі, былі ружовымі, што сведчыць аб наяўнасці жыццяздольных бактэрый у біяплёнцы (мал. 2А). У адрозненне ад гэтага, біяфільм, апрацаваная запраўкай Ag Oxysols, была ў першую чаргу сіняй, што сведчыць аб тым, што астатнія бактэрыі на паверхні скуры свінні былі нежыццяздольнымі бактэрыямі (мал. 2, б). Змешаная сіняя і ружовая афарбоўка назіралася ў біяфільмах, апрацаваных павязкамі, якія змяшчаюць AG1+, што сведчыць аб наяўнасці жыццяздольных і нежыццяздольных бактэрый у біяфільме (мал. 2С), тады як павязкі EDTA/BC, якія змяшчаюць AG1+, былі пераважна сінімі з некаторымі ружовымі плямамі. з указаннем участкаў, якія не ўплываюць срэбнай запраўкай (малюнак 2D). Колькаснае вызначэнне актыўных (ружовых) і неактыўных (сініх) абласцей паказала, што пластыр кіравання быў 75% актыўным (малюнак 2E). AG1 + + EDTA/BC павязкі праводзяцца аналагічна з кіслароднымі салянымі павязкамі, з выжывальнасцю 13% і 14% адпаведна. Запраўка AG1+ таксама знізіла жыццяздольнасць бактэрый на 21%. Затым гэтыя біяфільмы назіраліся пры дапамозе сканавання электроннай мікраскапіі (SEM). Пасля лячэння кантрольнай запраўкай і запраўкай AG1+ назіраецца пласт Pseudomonas aeruginosa, які ахоплівае свіное скуру (малюнак 2F, H), тады як пасля апрацоўкі з запраўкай AG1+ было выяўлена некалькі бактэрыяльных клетак, і пад ім было выяўлена мала бактэрыяльных клетак. Калагенавыя валокны можна разглядаць як тканкавую структуру свінай скуры (малюнак 2G). Пасля лячэння AG1 + + EDTA/BC запраўкі, бактэрыяльныя бляшкі і асноўныя бляшкі для калагена былі бачныя (мал. 2I).
Візуалізацыя біяфільма Pseudomonas aeruginosa пасля срэбнай апрацоўкі. (A-D) Бактэрыяльная жыццяздольнасць у біяфільмах Pseudomonas Aeruginosa, выгадаваных на свіней скуры, была візуалізавана з выкарыстаннем Prestoblue Difinity Dye 24 гадзіны пасля лячэння срэбнымі павязкамі або не-антимікробных павязкаў. Жывыя бактэрыі-гэта ружовыя, нежыццяздольныя бактэрыі, а скура свіней сінія. (Е) Колькаснае вызначэнне біяфільмаў Pseudomonas Aeruginosa, вырашчаных на свіней-скуры (ружовая пляма) з выкарыстаннем сканавання электроннай мікраскапіі малюнка Pro версіі 10 (FI) і апрацаваны срэбнай запраўкай або неімікробнымі павязкамі на працягу 24 гадзін. SEM SCALE BAR = 5 мкм. (J - M) Каланіяльныя біяфільмы выраслі на фільтрах і былі афарбаваны рэактыўным фарбавальнікам Prestoblue пасля 24 гадзін інкубацыі з срэбнымі павязкамі.
Каб вызначыць, ці паўплывала пільны кантакт паміж павязкамі і біяфільмамі эфектыўнасці павязкаў, каланіяльныя біяфільмы, размешчаныя на плоскай паверхні, апрацоўваліся павязкамі на працягу 24 гадзін, а затым афарбаваны рэактыўнымі фарбавальнікамі. Нелечаная біяпленка была ў колеры цёмна -ружовага колеру (малюнак 2J). У адрозненне ад біяфільмаў, апрацаваных павязкамі, якія змяшчаюць кіслародныя солі AG (малюнак 2K), біяфільмы, апрацаваныя павязкамі, якія змяшчаюць AG1+ або AG1++ EDTA/BC, выяўлялі паласы ружовага афарбоўвання (мал. 2л, М). Гэтая ружовая афарбоўка паказвае на наяўнасць жыццяздольных бактэрый і звязана з плошчай шва ў запраўцы. Гэтыя пашытыя ўчасткі ствараюць мёртвыя прасторы, якія дазваляюць выжыць бактэрыі ў біяплёнцы.
Каб ацаніць эфектыўнасць срэбных павязкаў у натуральных умовах, поўная таўшчыня выразаныя раны мышэй, заражаных спелымі S. aureus і P. aeruginosa Biofilms, былі апрацаваны нецімікробнымі павязкамі або срэбнымі павязкамі. Пасля 3 дзён лячэння макраскапічны аналіз малюнкаў паказаў меншыя памеры раны пры лячэнні кіслароднымі салянымі павязкамі ў параўнанні з неімікробным кіраваннем і іншымі срэбнымі павязкамі (мал. 3А). Каб пацвердзіць гэтыя назіранні, раны былі сабраны, а плошча раны, а рээпітэлізацыю колькасна ацэньвалі на гематаксіліне і афарбаваных эозін тканках з выкарыстаннем праграмнага забеспячэння Image Pro версіі 10 (мал. 3i-L).
Уплыў срэбных павязкаў на паверхню раны і паўторнае эпітэлізацыю ран, заражаных біяпленкамі. (A - H) Маленькія клеткі, заражаныя біяфільмамі Pseudomonas aeruginosa (A - D) і стафілакокавай апараце (E - H) пасля трохдзённага лячэння неимикробный кантрольнай запраўкай, кіслароднай салёнай запраўкай AG1+ і AG1++ AG1++ AG1+ AG1+ запраўка. Рэпрэзентатыўныя макраскапічныя выявы. Раны мышэй з Ag1 + + EDTA/BC запраўкай. (IL) прадстаўнічая інфекцыя Pseudomonas aeruginosa, гісталагічныя зрэзы, афарбаваныя гематаксілінам і эозінам, выкарыстоўваюцца для колькаснай ацэнкі плошчы раны і рэгенерацыі эпітэлія. Колькаснае вызначэнне плошчы раны (M, O) і працэнтнай рээпітэлізацыі (N, P) ран, заражаных псеўдамонасам Aeruginosa (M, N) і стафілакокам (O, P) біяфільмы (у групе лячэння N = 12). Графікі паказваюць сярэднюю +/- Стандартная памылка. * азначае p = <0,05 ** азначае p = <0,01; Макраскапічная шкала = 2,5 мм, гісталагічная шкала = 500 мкм.
Колькаснае вызначэнне раненняў у ранах, заражаных біяфільмай Pseudomonas aeruginosa (малюнак 3M), паказала, што раны, апрацаваныя Ag Oxysalts, мелі сярэдні памер раны 2,5 мм2, у той час як неімікробны кантрольны павязка меў сярэдні памер раны 3,1 мм2, а гэта не так, чаго няма праўда. дасягнула статыстычнай значнасці (малюнак 3M). р = 0,423). Раны, апрацаваныя AG1+ або AG1++ EDTA/BC, не выявілі зніжэння плошчы раны (3,1 мм2 і 3,6 мм2 адпаведна). Лячэнне кіслародам салёнай запраўкай AG спрыяла паўторнай эпітэлізацыі ў большай ступені, чым неімікробная запраўка (34% і 15% адпаведна; P = 0,029) і AG1+ або AG1++ EDTA/BC (10% і 11%) ( Малюнак 3N). . , адпаведна).
Падобныя тэндэнцыі ў зоне раны і рэгенерацыі эпітэлія назіраліся ў ранах, заражаных біяфільмамі S. aureus (мал. 3O). Павязкі, якія змяшчаюць кіслародныя срэбныя солі, зніжаюць плошчу раны (2,0 мм2) на 23% у параўнанні з кантрольнай не-антымікробнай запраўкай (2,6 мм2), хоць гэта зніжэнне было неістотным (р = 0,304) (мал. 3O). Акрамя таго, плошча раны ў лячэбнай групе AG1+ была некалькі зніжана (2,4 мм2), у той час як рана, апрацаваная AG1++ EDTA/BC, не паменшыла плошчу раны (2,9 мм2). Кіслародныя солі AG таксама спрыялі паўторнай эпітэлізацыі ран, заражаных біяфільмам S. aureus (31%) у большай ступені, чым тыя, якія атрымлівалі неімікробныя павязкі (12%, р = 0,003) (мал. 3, п). Запраўка AG1+ (16%, р = 0,903) і AG+ 1+ EDTA/BC запраўка (14%, р = 0,965) паказалі ўзроўні рэгенерацыі эпітэлія, падобныя на кантроль.
Для візуалізацыі ўплыву срэбных павязкаў на матрыцу біяфільма было праведзена афарбоўванне тото 1 і Syto 60 (hast. IODIDE TOTO 1-гэта клеткавы фарбавальнік, які можа быць выкарыстаны для дакладнай візуалізацыі пазаклеткавых нуклеінавых кіслот, якія багатыя ў EPS біяфільмаў. Syto 60 - гэта клеткавы пранікальны фарбавальнік, які выкарыстоўваецца ў якасці Contrestain16. Назіранні за льодыдам Toto 1 і Syto 60 у ранах, прышчэпленых біяфільмамі Pseudomonas aeruginosa (мал. 4, D) і стафілакока (мал. 4i-L), паказалі, што пасля 3-х дзён лячэння запраўкі EPS у біяфільме значна знізіўся. якія змяшчаюць аксігенаваныя солі Ag і Ag1 + + EDTA/BC. AG1+ павязкі без дадатковых антыбіёфільмавых кампанентаў значна зніжаюць Без клетак ДНК у ранах, прышчэпленых Pseudomonas aeruginosa, але былі менш эфектыўнымі ў ранах, прышчэпленых стафілакокам.
У натуральных умовах візуалізацыю біяпленкі раны пасля 3 дзён лячэння кантролем або срэбнымі павязкамі. Канфакальныя выявы Pseudomonas aeruginosa (A - D) і Staphylococcus aureus (I -L), афарбаваныя TOTO 1 (зялёным) для візуалізацыі пазаклеткавых нуклеінавых кіслот, кампанента пазаклеткавых палімераў біяфільма. Для афарбоўвання ўнутрыклеткавых нуклеінавых кіслот выкарыстоўвайце Syto 60 (чырвоны). кіслоты. П. Сканіраванне электроннай мікраскапіі раненняў, заражаных псеўдамонасам Aeruginosa (E - H) і стафілакокам -стам (M - P) біяфільмы пасля 3 -х дзён лячэння кантролем і срэбнымі запраўкамі. SEM SCALE BAR = 5 мкм. Канкакальная шкала візуалізацыі = 50 мкм.
Сканаванне электроннай мікраскапіі паказала, што мышы, прышчэпленыя біяпленкамі, псеўдамонас Aeruginosa (малюнак 4E-H) і стафілакок (малюнак 4M-P) мелі значна менш бактэрый у сваіх ранах пасля 3-х дзён лячэння з срэбнымі павязкамі.
Каб ацаніць уплыў срэбных павязкаў на запаленне раны ў мышэй, інфіцыраваных біяфільмамі, участкі біяфільмавых ран, якія атрымлівалі кантрольныя або срэбныя павязкі на працягу 3 дзён, былі імунагістахімічна афарбаванымі з выкарыстаннем антыцелаў, характэрных для нейтрофілаў і макрафагаў. Колькаснае вызначэнне нейтрофілаў і макрафагаў унутрана. Тканіна грануляцыі. Малюнак 5). Усе срэбныя павязкі скарацілі колькасць нейтрофілаў і макрафагаў у ранах, заражаных Pseudomonas aeruginosa ў параўнанні з неімікробным кантролем пасля трохдзённага лячэння. Аднак лячэнне запраўкай з кіслародам срэбра прывяло да большага зніжэння нейтрофілаў (р = <0,0001) і макрафагаў (р = <0,0001) у параўнанні з іншымі выпрабаванымі срэбнымі павязкамі (мал. 5i, j). Хоць AG1++ EDTA/BC аказаў большы ўплыў на біяфільм раны, ён знізіў узровень нейтрофіла і макрофага ў меншай ступені, чым у запраўцы AG1+. Умераныя раны, заражаныя S. aureus biofilm, таксама назіраліся пасля апранання з Ag (P = <0,0001), Ag1+ (P = 0,0008) і Ag1 ++ EDTA/BC (P = 0,0043) аксізолам у параўнанні з кантролем. Падобныя тэндэнцыі назіраюцца для нейтропеніі. павязка (мал. 5к). Аднак толькі запраўка з солі з кіслародам AG паказала значнае зніжэнне колькасці макрафагаў у грануляцыйнай тканіны ў параўнанні з кантролем у ранах, заражаных біяфільмамі S. aureus (P = 0,0339) (мал. 5л).
Нейтрофілы і макрофагі былі колькасна ацэнены ў ранах, заражаных біяфільмамі Pseudomonas aeruginosa і Staphylococcus aureus пасля 3 дзён лячэння неімікробным кантролем або срэбнымі запраўкамі. Нейтрофілы (AD) і макрофагов (EH) колькасна ацэньваюць у тканкавых адрэзах, афарбаваных антыцеламі, характэрнымі для нейтрофілаў або макрофагов. Колькаснае вызначэнне нейтрофілаў (I і K) і макрафагаў (J і L) у ранах, заражаных псеўдамонасам Aeruginosa (I і J) і стафілакок -аўрэем (K&L). N = 12 за групу. Графікі паказваюць сярэднюю +/- Стандартная памылка, значэнні значнасці ў параўнанні з неібактэрыйным кіраваннем, * азначае p = <0,05, ** азначае p = <0,01; *** азначае p = <0,001; паказвае p = <0,0001).
Затым мы ацанілі ўплыў срэбных павязкаў на незалежнае ад інфекцыі гаенне. Неінфіцыраваныя эксизизированныя раны апрацоўвалі не-антымікробным кіраваннем або срэбнай запраўкай на працягу 3 дзён (мал. 6). Сярод выпрабаваных срэбных павязкаў толькі раны, апрацаваныя кіслародам салёнай запраўкай, выглядалі менш на макраскапічных малюнках, чым раны, апрацаваныя кантролем (мал. 6, D). Колькаснае вызначэнне плошчы раны з выкарыстаннем гісталагічнага аналізу паказала, што сярэдняя плошча раны пасля лячэння запраўкай Ag Oxysols склала 2,35 мм2 у параўнанні з 2,96 мм2 для ран, якія атрымлівалі кантрольную групу, але гэтая розніца не дасягнула статыстычнай значнасці (р = 0,488) (мал.) (Мал. . 6i). У адрозненне ад гэтага, пасля лячэння AG1+ (3,38 мм2, р = 0,757) або AG1++ EDTA/BC (4,18 мм2, р = 0,054) у параўнанні з кантрольнай групай. Падвышаная рэгенерацыя эпітэлія назіралася пры запраўцы Ag Oxysol у параўнанні з кантрольнай групай (30% супраць 22% адпаведна), хоць гэта не дасягнула значэння (р = 0,067), гэта даволі значнае і пацвярджае папярэднія вынікі. Запраўка з аксізоламі спрыяе паўторнай эпітэлізацыі. -Пітэлізацыю незаражаных ран17. У адрозненне ад гэтага, лячэнне AG1+ або AG1++ EDTA/BC павязкі не аказала эфекту і не выявіла зніжэння паўторнага эпітэлізацыі ў параўнанні з кантролем.
Уплыў апранання срэбных ран на гаенне ран у неінфіцыраваных мышэй з поўнай рэзекцыяй. (AD) Рэпрэзентатыўныя макраскапічныя выявы ран пасля трохдзённага лячэння неімікробнай запраўкай і срэбнай запраўкай. (EH) Рэпрэзентатыўныя ўчасткі раны, афарбаваныя гематаксілінам і эозінам. Колькаснае вызначэнне плошчы раны (I) і адсотак пераабсталявання (J) разлічвалася з гісталагічных раздзелаў у сярэдзіне раны з выкарыстаннем праграмнага забеспячэння для аналізу малюнкаў (n = 11–12 у групе лячэння). Графікі паказваюць сярэднюю +/- Стандартная памылка. * азначае p = <0,05.
Срэбра мае доўгую гісторыю выкарыстання ў якасці антымікробнай тэрапіі пры гаенні ран, але мноства розных прэпаратаў і спосабаў дастаўкі могуць прывесці да адрозненняў у антымікробнай эфектыўнасці 18. Больш за тое, антыбіёфільмавыя ўласцівасці пэўных сістэм дастаўкі срэбра да канца не вывучаны. Хоць імунная рэакцыя гаспадара адносна эфектыўная супраць планктонавых бактэрый, ён, як правіла, менш эфектыўны супраць Biofilms19. Планктонавыя бактэрыі лёгка фагацытаваны макрафагамі, але ў біяфільмах агрэгаваныя клеткі ствараюць дадатковыя праблемы, абмяжоўваючы рэакцыю гаспадара ў той ступені, у якой імунныя клеткі могуць прайсці апоптоз і вызваліць супрацьзапаленчыя фактары для павышэння імуннай рэакцыі20. Было заўважана, што некаторыя лейкацыты могуць пракрасціся ў Biofilms21, але не ў стане фагацытозы, калі гэтая абарона будзе парушана22. Для падтрымкі імуннай рэакцыі гаспадара павінна быць выкарыстаны цэласны падыход ад інфекцыі біяпленкі раны. Разбор раны можа фізічна парушыць біяфільм і зняць большую частку біябердэна, але імунны адказ гаспадара можа быць неэфектыўным у адносінах да пакінутага біяфільма, асабліва калі імунны адказ гаспадара парушаецца. Такім чынам, антымікробныя метады лячэння, такія як срэбныя павязкі, могуць падтрымліваць імунную рэакцыю гаспадара і ліквідаваць біяпленкі. Склад, канцэнтрацыя, растваральнасць і субстрат дастаўкі могуць уплываць на антымікробную эфектыўнасць срэбра. У апошнія гады поспехі ў тэхналогіі апрацоўкі срэбра зрабілі гэтыя павязкі больш эфектыўнымі 9,23. Па меры прасоўвання тэхналогіі срэбнай запраўкі, важна зразумець эфектыўнасць гэтых павязкаў у кантроль за раней інфекцыяй і, што яшчэ важней, уздзеянне гэтых магутных формаў срэбра на ўмовы раны і вылячэнне.
У гэтым даследаванні мы параўноўвалі эфектыўнасць дзвюх перадавых срэбных павязкаў са звычайнымі срэбнымі павязкамі, якія вырабляюць іёны Ag1+ супраць біяфільмаў, выкарыстоўваючы розныя мадэлі in vitro і in vivo. Мы таксама ацанілі ўплыў гэтых павязкаў на ранеснае асяроддзе і незалежнае ад інфекцыі гаенне. Каб звесці да мінімуму ўплыў матрыцы дастаўкі, усе выпрабаваныя срэбныя павязкі складаліся з карбоксиметилцеллюлозы.
Наша папярэдняя ацэнка гэтых срэбных павязкаў супраць каланіяльных біяфільма некалькі дзён. Акрамя таго, гэтыя запраўкі прадухіляюць паўторнае ўтварэнне біяпленкі пры паўторным уздзеянні планктонаў. Запраўка AG1+ утрымлівала срэбра хларыд, аднолькавае срэбнае злучэнне і базавую матрыцу, як Ag1++ EDTA/BC, і аказала абмежаваны ўплыў на жыццяздольнасць бактэрый у біяплёнцы за той жа перыяд. Назіранне, што запраўка AG1++ EDTA/BC было больш эфектыўным у дачыненні да біяфільма, чым запраўка AG1+, якая складаецца з той жа матрыцы, і срэбнае злучэнне падтрымлівае меркаванне, што для павышэння эфектыўнасці срэбра хларыду срэбра супраць біяфільма неабходныя дадатковыя інгрэдыенты, як паведамлялася, як паведамлялася у іншым месцы15. Гэтыя вынікі падтрымліваюць ідэю, што БЦ і EDTA адыгрываюць дадатковую ролю, спрыяючы агульнай эфектыўнасці запраўкі, і што адсутнасць гэтага кампанента ў павязках AG1+ можа спрыяць невыкананням эфектыўнасці ў прабірцы. Мы выявілі, што салёныя павязкі з кіслародам, якія вырабляюць іёны Ag2+ і Ag3+, выяўлялі больш моцную антыбактэрыйную эфектыўнасць, чым Ag1+ і на ўзроўні, падобныя на Ag1++ EDTA/BC. Аднак з -за высокага акісляльна -аднаўленчага патэнцыялу незразумела, як доўга іёны AG3+ застаюцца актыўнымі і эфектыўнымі супраць біяфільмаў раны і таму заслугоўваюць далейшага вывучэння. Акрамя таго, існуе мноства розных павязкаў, якія генеруюць іёны Ag1+, якія не былі правераны ў гэтым даследаванні. Гэтыя павязкі складаюцца з розных срэбных злучэнняў, канцэнтрацый і асноўных матрыц, якія могуць паўплываць на дастаўку іёнаў Ag1+ і іх эфектыўнасці супраць біяфільмаў. Варта таксама адзначыць, што існуе мноства розных мадэляў у прабірцы і ў натуральных умовах, якія выкарыстоўваюцца для ацэнкі эфектыўнасці раневых павязкаў супраць біяфільмаў. Тып выкарыстоўванай мадэлі, а таксама ўтрыманне солі і бялку ў асяроддзях, якія выкарыстоўваюцца ў гэтых мадэлях, паўплывае на эфектыўнасць запраўкі. У нашай мадэлі in vivo мы дазволілі біяфільме спець in vitro, а потым перанеслі яе на скурную паверхню раны. Імунная рэакцыя гаспадара мышы адносна эфектыўны ў дачыненні да планктонавых бактэрый, якія наносяцца на рану, утвараючы тым самым біяфільм, калі рана зажывае. Даданне спелай біяпленкі да раны абмяжоўвае эфектыўнасць імуннай рэакцыі гаспадара на фарміраванне біяпленкі, дазваляючы спелым біяплёнцы ўсталяваць сябе ў ране, перш чым пачалося лячэнне. Такім чынам, наша мадэль дазваляе нам ацаніць эфектыўнасць антымікробных павязкаў на спелыя біяфільмы, перш чым раны пачнуць вылечваць.
Мы таксама выявілі, што падкладка паўплывала на эфектыўнасць срэбных павязкаў на біяфільмах, вырашчаных у прабірцы і свіней. Цесны кантакт з ранай лічыцца крытычнай для антымікробнай эфектыўнасці запраўкі24,25. Павязкі, якія змяшчаюць кіслародныя солі АГ, знаходзіліся ў цесным кантакце са спелымі біяфільмамі, што прывяло да значнага зніжэння колькасці жыццяздольных бактэрый у біяпленцы праз 24 гадзіны. У адрозненне ад гэтага, калі апрацавалі павязкі AG1+ і AG1++ EDTA/BC, засталася значная колькасць жыццяздольных бактэрый. Гэтыя павязкі ўтрымліваюць швы па ўсёй даўжыні запраўкі, якая стварае мёртвыя прасторы, якія перашкаджаюць цеснаму кантакту з біяфільмам. У нашых даследаваннях in vitro гэтыя бескантактавыя ўчасткі перашкаджалі знішчэнню жыццяздольных бактэрый у біяплёнцы. Мы ацанілі бактэрыяльную жыццяздольнасць толькі пасля 24 гадзін лячэння; З цягам часу, калі запраўка становіцца больш насычанай, можа быць менш мёртвай прасторы, зніжаючы плошчу для гэтых жыццяздольных бактэрый. Аднак гэта падкрэслівае важнасць складу запраўкі, а не толькі тыпу срэбра ў запраўцы.
У той час як даследаванні in vitro карысныя для параўнання эфектыўнасці розных срэбраных тэхналогій, таксама важна зразумець уздзеянне гэтых павязкаў на біяфільмы ў натуральных умовах, дзе тканіны гаспадара і імунныя рэакцыі спрыяюць эфектыўнасці павязкаў супраць біяпленкі. Уплыў гэтых павязкаў на біяфільмы раны назіраецца з выкарыстаннем сканавання электроннай мікраскапіі і афарбоўвання EPS біяплёнкі з выкарыстаннем ўнутрыклеткавых і пазаклеткавых ДНК -фарбавальнікаў. Мы выявілі, што пасля 3-х дзён лячэння ўсе павязкі былі эфектыўнымі для зніжэння без клетак ДНК пры біяплечных ранах, але запраўка AG1+ была менш эфектыўнай пры стафілакок-інфіцыраваных ранах. Сканаванне электроннай мікраскапіі таксама паказала, што значна менш бактэрый прысутнічала ў ранах, апрацаваных срэбнымі павязкамі, хоць гэта было больш выяўлена пры запраўцы солі з кіслародам і запраўкай AG1++ EDTA/BC у параўнанні з запраўкай AG1+. Гэтыя дадзеныя паказваюць, што выпрабаваныя срэбныя павязкі мелі розную ступень уздзеяння на структуру біяпленкі, але ні адна з срэбных павязкаў не змагла выкараніць біяфільм, падтрымліваючы патрэбу ў цэласным падыходзе да лячэння біяпленкі раны; Выкарыстанне срэбных павязкаў. Лячэнне папярэднічае фізічнаму разбору для выдалення большай часткі біяпленкі.
Хранічныя раны часта знаходзяцца ў стане цяжкага запалення, а лішнія запаленчыя клеткі застаюцца ў тканіны раны на працягу доўгага перыяду часу, што выклікае пашкоджанне тканін і высільваючы кісларод, неабходны для эфектыўнага клеткавага метабалізму і функцыі ў раненні26. Біяфільмы ўзмацняюць гэтую варожую рану, негатыўна ўплываючы на вылячэнне рознымі спосабамі, уключаючы прыгнёт праліферацыі клетак і міграцыю і актывацыю супрацьзапаленчых цітокіны27. Па меры таго, як срэбныя павязкі становяцца больш эфектыўнымі, важна зразумець, які ўплыў яны аказваюць на рану і вылячэнне.
Цікава, што, хоць усе срэбныя павязкі закранулі біяплёнкі, толькі кіслародныя павязкі з кіслародам павялічвалі паўторную эпітэлізацыю гэтых заражаных ран. Гэтыя дадзеныя падтрымліваюць нашы папярэднія высновы17 і дадзеныя Kalan et al. (2017) 28, які прадэманстраваў добрую бяспеку і таксічнасць профіляў кіслароду, срэбраных соляў, паколькі меншыя канцэнтрацыі срэбра былі эфектыўнымі супраць біяфільмаў.
Наша цяперашняе даследаванне падкрэслівае адрозненні ў срэбнай тэхналогіі паміж антымікробным срэбным павязкам і ўздзеяннем гэтай тэхналогіі на ранеснае асяроддзе і незалежнае ад інфекцыі гаенне. Аднак гэтыя вынікі адрозніваюцца ад папярэдніх даследаванняў, якія паказваюць, што запраўка AG1 + + EDTA/BC палепшыла параметры лячэння пацярпелых трусоў у натуральных умовах. Аднак гэта можа быць звязана з адрозненнямі ў мадэлях жывёл, перыяды вымярэння і метадаў прымянення бактэрый29. У гэтым выпадку вымярэнні раны праводзіліся праз 12 дзён пасля траўмы, каб забяспечыць дзеючыя інгрэдыенты запраўкі дзейнічаць на біяфільме на працягу больш доўгага перыяду часу. Гэта пацвярджаецца даследаваннем, якое паказала, што клінічна заражаныя язвы ног, апрацаваныя Ag1 + + EDTA/BC Выкарыстанне неімікробных прэпаратаў. лекі. Павязкі CMC, каб паменшыць памер язваў30.
Было паказана, што пэўныя формы і канцэнтрацыі срэбра былі цытастатычнымі in vitro 11, але гэтыя вынікі in vitro не заўсёды прыводзяць да неспрыяльных эфектаў у натуральных умовах. Акрамя таго, поспехі ў срэбнай тэхналогіі і лепшае разуменне срэбных злучэнняў і канцэнтрацый у запраўках прывялі да развіцця мноства бяспечных і эфектыўных срэбных павязкаў. Аднак, калі тэхналогія срэбнай запраўкі прасоўваецца, важна зразумець уплыў гэтых павязкаў на навакольнае асяроддзе раны 31,32,33. Раней паведамлялася, што павелічэнне хуткасці паўторнага эпітэлізацыі адпавядае павелічэнню долі супрацьзапаленчых макрафагаў М2 у параўнанні з празапаленчым фенатыпам М1. Гэта было адзначана ў папярэдняй мышынай мадэлі, дзе срэбныя гідрагелевыя раны параўноўваліся з серабрыстым сульфадыязінам і неімікробным гідрагелямі34.
Хранічныя раны могуць выяўляць празмернае запаленне, і было заўважана, што наяўнасць лішніх нейтрофілаў можа нанесці шкоду гаенню раны35. У даследаванні ў знясіленых нейтрофіламі мышэй наяўнасць нейтрофілаў затрымлівала паўторна. Наяўнасць лішніх нейтрофілаў прыводзіць да высокага ўзроўню пратэаз і рэактыўных відаў кіслароду, такіх як супероксід і перакіс вадароду, якія звязаны з хранічнымі і павольнымі ранамі37,38. Сапраўды гэтак жа павелічэнне колькасці макрофагаў, калі некантралюемыя, можа прывесці да затрымкі гаення раны39. Гэта павелічэнне асабліва важна, калі макрафагі не ў стане перайсці ад празапаленчага фенатыпу да прамога фенатыпу, што прыводзіць да таго, што раны не выйшлі з запаленчай фазы гаення40. Мы назіралі зніжэнне нейтрофілаў і макрофагаў у біяпленкі, інфіцыраваных ранамі пасля 3 дзён лячэння ўсімі срэбнымі павязкамі, але памяншэнне было больш выяўлена з кіслароднымі салянымі павязкамі. Гэта зніжэнне можа стаць непасрэдным вынікам імуннай рэакцыі на срэбра, рэакцыя на зніжэнне біябердэна, альбо рана знаходзіцца ў больш познім стадыі вылячэння, а значыць, імунныя клеткі ў ране. Зніжэнне колькасці запаленчых клетак у ране можа падтрымліваць асяроддзе, якое спрыяе гаенню ран. Механізм дзеяння таго, як Ag Oxysalts спрыяе самастойнаму гаенню, які залежыць ад інфекцыі, незразумелы, але здольнасць Ag Oxysalts вырабляць кісларод і знішчаць шкодны ўзровень перакісу вадароду, медыятар запалення, можа растлумачыць гэта і патрабуе далейшага вывучэння17.
Хранічныя нелегаючыя заражаныя раны ствараюць праблему як для лекараў, так і для пацыентаў. Хоць многія павязкі сцвярджаюць, што антымікробная эфектыўнасць, даследаванні рэдка засяроджваюцца на іншых ключавых фактарах, якія ўплываюць на мікраасяроддзе раны. Гэта даследаванне паказвае, што розныя срэбныя тэхналогіі валодаюць рознай антымікробнай эфектыўнасцю і, што галоўнае, розным уздзеяннем на навакольнае асяроддзе раны і вылячэнне, незалежна ад заражэння. Хоць гэтыя даследаванні ў прабірцы і ў натуральных умовах паказваюць эфектыўнасць гэтых павязкаў пры лячэнні раневых інфекцый і садзейнічання вылячэнню, для ацэнкі эфектыўнасці гэтых павязкаў у клініцы неабходныя рандомізаваныя кантраляваныя выпрабаванні.
Наборы дадзеных, якія выкарыстоўваюцца і/або прааналізаваны падчас бягучага даследавання, даступныя ў адпаведнага аўтара па разумным запыце.
Час паведамлення: 15 ліпеня 2014 г.